単位/ mgで販売されている酵素1gを購入する方法は?

私は西洋ワサビペルオキシダーゼ1gを購入しようとしています。シグマアルドリッチでは単位/ mgとして販売されています。私はこのユニットが何であるか混乱しています。それは50-150,150-250,250-330 u/mgである。私が現在理解しているのは、ペルオキシダーゼが最低167mgあるべきであるよりも、50〜150u/mgの25KU(キロ単位)を購入する場合です。これは正しい理解ですか?西洋ワサビペルオキシダーゼの25KUの価格は$ 95なので、それは1/2gだけで支払うのはばかげているようです。

4

2 答え

Sigma Aldrichは、その単位を次のように定義しています。

1つのピロガロール単位は20℃でpH 6.0で20秒でピロガロールから1.0 mgのプルプロガリンを形成する。

あなたが生物学的イメージング実験を行っていると仮定すると、これらの活動値は、あなたが質量よりも何を得ているかについてより多くを示します。

カジュアルなインターネット検索から、HRPは非常に高価に見えます。私はあなたの研究のために実際にそれを必要とするかどうかを検討します。

5
追加された
確かに。 1gは多くの場合、多くのHRPです。 〜150U/mg HRPの10mgは、いくつかのウェルプレートの過酸化物アッセイを行うのに十分である。私は通常、ストック溶液を分取し、エクストラを凍結します。
追加された 著者 Stephen Furlani,
このペーパーについて話している場合、彼らは1mgの(おそらく彼らは連続希釈をしたくないため、1mgは体重を測定するのに実用的な最低値なので)〜170U/mg HRPであるので、約17Uの溶液を調製する必要があります/ mL。どのくらいのHRPが必要なのかは、購入するものの活動レベルによって決まります。
追加された 著者 Stephen Furlani,
@ jarred:いいえ、あなたはおそらくしません。あなたが知る必要があるのは、ある量の酵素の活性であり、U/mgが与えるものです。
追加された 著者 dcapocelli,
また、酵素を使用する際には、緩衝液の水溶液で作業しなければならないことに気付きました。これは、ピロールで作業する場合には少し制限があります。
追加された 著者 dcapocelli,
私はこれをポリピロールの合成に使用しています。そうするために、私はHRPの大部分を測定することができる必要があります。
追加された 著者 Mathieu Guindon,
さて、それは意味がある@Michael
追加された 著者 Mathieu Guindon,

この酵素は、重量ではなく、活性によって販売されています。シグマとは異なる説明は、1mgの粉末または凍結乾燥残留物の活性酵素の量(その定義に従った単位)です。純粋なHRPを購入することはありません。とにかく、「純粋な」HRPは、少なくとも7つのアイソフォームがあり、MWやグリコシル化パターンなどがわずかに異なるため、ちょっと誤解されています。したがって、U/mg数がより高い 活性酵素の残存mgはより高いです。

ほとんどのHRPは約40,000g/molの分子量を有するようである。アッセイ条件で基質のHRPの速度定数$ k_ {cat} $を知っていれば、速度定数とMWを使用してU/mgという用語で「理論的」な活動を計算できます。私の推測では、この理論的な活性は250〜330U/mgよりも高くなると考えられます。

購入するU/mgのこの「理論的」な活動に対する比率は、あなたが購入する活性成分である重量の割合です。おそらく最も安価な調製のために、重量の90%以上が活性酵素ではない。多分塩、水、不活性/ミスフォールドされたHRP分子、および他のタンパク質汚染物質が様々な程度で存在する。

3
追加された